細(xì)胞的凍存操作

一、用品

1、5%胰蛋白酶

2、含10%~20%血清培養(yǎng)液

3、DMSO或無色新鮮甘油（15磅蒸汽高壓消毒）

4、吸管、離心管、凍存管

二、操作步驟

1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但是對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，已將長滿的細(xì)胞凍存后生存率低。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液。

2、用胰蛋白酶把單層生長的細(xì)胞消化下來，懸浮生生長的細(xì)胞則不需要處理。依據(jù)傳代方法把消化好的細(xì)胞收集于離心管并計(jì)數(shù)，離心。

3、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入配好的凍存培養(yǎng)液（含10%的DMSO或甘油），凍存液中細(xì)胞的zui終密度為5*10^6/mL~1*10^7/mL。用吸管輕輕地吹打使細(xì)胞均勻，然后分裝入無菌凍存管中。

4、裝完細(xì)胞后的凍存管即可直接凍存。


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