細胞株凍存條件及方法

1、凍存條件：建議采用40-50%FBS+8%-10%DMSO+該細胞株無血清培養基

2、凍存方法：

①梯度凍存：4℃——1h；-20℃——30min；-80℃——過夜

②使用凍存盒：直接放入-80℃冰箱中過夜（有些細胞不適應此種方法）

3、復蘇方法：

①打開水浴，將培養基放入水浴中，待其穩定至37℃；

②細胞從液氮內取出后，應快速將細胞放于37℃水浴中，輕輕振搖，使其溶化，（盡量避免溶化前凍存管脫離水浴）；

③將溶化后將細胞凍存懸液離心，轉速1000rpm，3min,后棄去上清，使細胞重懸在新鮮培養液中，進行培養；

④細胞在培養箱中貼壁24h后，更換新鮮培養基，待其長滿，進行傳代。



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